?
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
BL21 感受態(tài)細胞0.1 mL×10多少錢Anti-EXPB-2 研究領域  腫瘤 神經生物學 細胞粘附分子 細胞外基質

動物細胞裂解液 A50mL說明書Anti-EML3 研究領域  細胞生物 免疫學 發(fā)育生物學

空腸彎曲菌PCR檢測試劑盒免費代測Anti-EDRF1/C10orf137 研究領域  腫瘤 細胞生物 免疫學 神經生物學

人核糖核酸酶P基因PCR測定試劑盒保存Anti-Ephrin A2/LERK6 研究領域  腫瘤 細胞生物 免疫學 神經生物學

小鼠載脂蛋白B100Elisa Kit品牌Anti-Endostatin/COL18A1 研究領域  細胞生物 免疫學 發(fā)育生物學

豬Apelin（APLN）elisa試劑盒Anti-Estrogen receptor beta 研究領域  細胞生物 發(fā)育生物學 信號轉導

小鼠17-α甲睪酮（17-αMT）elisa試劑盒Anti-Estrogen receptor beta 研究領域  神經生物學 信號轉導 細胞粘附分子 細胞外基質

豚鼠P物質（SP）elisa試劑盒Anti-ET-1 研究領域  神經生物學 信號轉導 細胞粘附分子 細胞骨架 細胞外基質

人谷氨酸脫羧酶65（GAD65）elisa試劑盒Anti-ERCC1 研究領域  細胞生物 發(fā)育生物學

人鈣調素特異抗體（CAM-ab）elisa試劑盒Anti-E2F6 研究領域  細胞生物 免疫學 發(fā)育生物學

人百日咳病毒抗體（IgM）elisa試劑盒Anti-EAAT2 研究領域  細胞生物 免疫學 發(fā)育生物學

牛乳過氧化物酶（LPO）elisa試劑盒Anti-EGFL7 研究領域  心血管 細胞生物 發(fā)育生物學

大鼠Kelch樣ECH相關蛋白1（KEAP1）elisa試劑盒Anti-alpha Elastin 研究領域  腫瘤 細胞生物 發(fā)育生物學

倉鼠極低密度脂蛋白（VLDL）elisa試劑盒Anti-EDNRA 研究領域  腫瘤 細胞生物 免疫學 發(fā)育生物學

人小梁網細胞價格Anti-EPH receptor A4 研究領域  神經生物學 細胞膜蛋白

異綠原酸CCaspase-9  白介素1-β轉化酶樣凋亡蛋白酶6（抗原） 大腸桿菌脂多糖IgG

蕓香柚皮苷Caspase-9   白介素1-β轉化酶樣凋亡蛋白酶6（抗原） 抗EphA1-R受體IgG

鳶尾黃素AD7C-NTP/NTP/AF peptide   神經絲蛋白蛋白多肽抗原（人） 兔抗人、大、小鼠酪氨酸蛋白激酶受體A2IgG

異麥角甾苷Caspase-10   半胱胺酸蛋白酶-10（抗原） 兔抗人、大、小鼠磷酸化酪氨酸蛋白激酶A2受體IgG

原蘇木素BCaspase-13   半胱胺酸蛋白酶蛋白-13（抗原） 酪氨酸蛋白激酶受體A4IgG

異鼠李素-3-O-新橙CD19(B-lymphocyte antigen CD19)  CD19 抗酪氨酸蛋白激酶A4IgG

標準品Clenbuterol Hydrochloride/BSA  鹽酸克侖特羅偶聯(lián)牛血清白蛋白BSA抗體

異槲皮苷Clenbuterol Hydrochloride/KLH  鹽酸克侖特羅偶聯(lián)血藍蛋白KLH 酪氨酸蛋白激酶受體B2IgG

乙酰紫堇靈Estradiol/BSA  雌二醇偶聯(lián)牛血清白蛋白 酪氨酸蛋白激酶受體B6IgG

原花青素B1DRADA/ADAR1(Double-stranded RNA-specific adesine deaminase)N terminal  雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗原（N端） 紅細胞生成素受體IgG
麻疹病毒PCR檢測試劑盒價格大鼠凝血因子Ⅲ(FⅢ)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT，避光1克

大鼠凝血因子Ⅷ相關抗原(FⅧ-Ag)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT1克

大鼠凝血因子Ⅹ(FⅩ)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：500克

大鼠凝血因子ⅩⅢ(FⅩⅢ)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：5克

大鼠凝血因子Ⅻ(FⅫ)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：5克

大鼠凝血因子IX(FIX)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

大鼠牛小腸堿性磷酸酶(CIAP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8°C5克

大鼠膀胱腫瘤抗原(BTA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克