?
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
重樓皂苷VI 55916-51-3實驗步驟Anti-LOXL4研究領(lǐng)域  腫瘤 心血管 免疫學(xué) 細胞凋亡

稱量紙使用說明書Anti-LGALS3BP研究領(lǐng)域  心血管 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 干細胞 生長因子和激素 細胞骨架 細胞外基質(zhì)

改良MRS瓊脂培養(yǎng)基實驗步驟Anti-LANCL2研究領(lǐng)域  心血管 發(fā)育生物學(xué) 染色質(zhì)和核信號 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 干細胞 生長因子和激素 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子

肽聚糖使用說明書Anti-LTBP4研究領(lǐng)域  細胞生物 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)

維生素M保存Anti-LRRC15研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 腫瘤細胞生物標(biāo)志物 表觀遺傳學(xué)

特級新生牛血清（100ml）現(xiàn)貨供應(yīng)Anti-Laminin Beta 2/Laminin S研究領(lǐng)域  心血管 細胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 通道蛋白

柚皮苷10236-47-2*Anti-LECT1研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物 免疫學(xué) 細胞凋亡

刀豆球蛋白A使用說明書Anti-Lipin 1研究領(lǐng)域  細胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 細胞凋亡

甜蜜素使用說明書Anti-LEU5/RFP2研究領(lǐng)域  細胞生物 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 細胞凋亡

豬腦心肌炎病毒PCR檢測試劑盒說明書Anti-LRRC62研究領(lǐng)域  細胞生物 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 干細胞 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶 細胞表面分子 細胞外基質(zhì) 表觀遺傳學(xué)

大鼠肝 Kupffer 細胞說明書Anti-LYL1研究領(lǐng)域  細胞生物 細胞凋亡 淋巴細胞 b-淋巴細胞

小鼠腎動脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基價格Anti-LMO2研究領(lǐng)域  腫瘤 細胞生物

大鼠神經(jīng)星形膠質(zhì)細胞*培養(yǎng)基報價Anti-LGR6研究領(lǐng)域  發(fā)育生物學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 細胞凋亡 細胞周期蛋白

L-谷氨酰胺溶液（100×）價格Anti-Liprin alpha 1/PPFIA1研究領(lǐng)域  細胞生物 細胞周期蛋白 細胞分化

腐胺使用說明書Anti-LAR/PTPRF研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) G蛋白偶聯(lián)受體 G蛋白信號

利卡靈-B；利卡靈BIL-18/IGIF(Interleukin-18)  白細胞介素-18/干擾素γ誘導(dǎo)因子TRIB2  MAPK調(diào)控蛋白TRB2抗體

肉豆蔻木脂素IL-23R(Interleukin-23 receptor)  白介素-23受體抗原TRIAD3  鋅指蛋白抑制NFκB蛋白抗體

澤瀉B-23醋酸酯；23-乙酰澤瀉BIL-1 Alpha (Interleukin-1 Alpha )  白介素1α抗原TRH  促甲狀腺素釋放激素抗體

原花青素B2IL-2 (Interleukin-2)Mouse、Ret  白介素2抗原（大、小鼠）TRF2  端粒結(jié)合蛋白2抗體

人參皂苷F1IL-2 (Interleukin-2)Human  IL-2抗原（人）TReP132/RAPA  癌抗雌激素抵抗蛋白2抗體

人參皂苷F2IL-23(Interleukin-23)  白介素-23抗原TREML2/TLT2  髓系細胞觸發(fā)受體樣轉(zhuǎn)錄因子2抗體

人參皂苷CKIL-4(Interleukin-4)  白介素4抗原TREML1/TLT1  髓系細胞觸發(fā)受體樣轉(zhuǎn)錄因子1抗體

異鼠李素-3-O-葡萄糖苷IL-4(Interleukin-4)human peptide  白介素4抗原TREM2  髓系細胞觸發(fā)受體2抗體

草質(zhì)素苷IL-5 peptide  白細胞介素5抗原TREM1  髓系細胞觸發(fā)受體1抗體

科羅索酸IL-6 (Interleukin-6) Human  白介素6TREM1  髓系細胞觸發(fā)受體1抗體
雞敗血支原體PCR檢測試劑盒規(guī)格人S100B蛋白(S-100B)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

人S100蛋白(S-100)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT1克

人S100鈣結(jié)合蛋白A8/鈣粒蛋白A(S100A8)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

人S100鈣結(jié)合蛋白A9/鈣粒蛋白B(S100A9)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

人Salusin-αELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：32片/箱

人SH2攜帶蛋白(SHC/SLP-76)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT25克

人Smad1ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT5克

人Smad7ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT100克