注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
HOBT大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞*培養(yǎng)基異香草 98%

NHS大鼠食管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基丁酸甲硫酯 98%

GABA大鼠食管平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基甲硫 99%

γ-L-Glutamyl-α-naphthylamide大鼠腸平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基吡 99%

γ-L-Glutamyl-β-naphthylamide大鼠腸粘膜上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基吡 98%

H-Glu-PNA大鼠腸動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基2,3,5-*基吡 99%

L-Glutamic acid γ-(3-carboxy-4-nitroanilide) ammonium salt大鼠腸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基2,3,5-*基吡 ≥99%, FCC, Kosher, FG

GSSG大鼠肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞*培養(yǎng)基異戊酸乙酯 99%

GSH大鼠肝動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基異戊酸乙酯 ≥99%, FCC, Kosher, FG

Histamine diphospate大鼠肝動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基(±)-2-甲基-1-丁 98%

Histamine大鼠小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基3,4-二甲氧基苯甲 99%

Histamine dihydrochloride大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基2',6'二氯-3'-氟苯乙酮   97%

L-Carsine大鼠肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基2,4-二氯-3-硝基-5-氟苯甲酸  97%

L-Dopa大鼠胃粘膜上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基4-氟苯乙酮 98%

T4大鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基對(duì)氟苯甲酸 98%

L-thyroxine sodium大鼠肝星形細(xì)胞*培養(yǎng)基4'-乙酮 99%

埃替非巴肽，依非巴特;安普利肽，依非巴肽Sox2  胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白TAF12  TATA框結(jié)合蛋白關(guān)聯(lián)因子12抗體

鹽酸埃羅替尼TSFP1/SP1(transcription factor Sp1)  SP1轉(zhuǎn)錄生長(zhǎng)因子抗原TACR3  速激肽受體3抗體

鹽酸埃羅替尼（標(biāo)準(zhǔn)品）SPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine)  富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白抗原TACC2/ AZU1  轉(zhuǎn)化酸性卷曲含蛋白質(zhì)2

爾它培南鈉;厄他培南鈉SRF(Serum response factor)  血清應(yīng)答因子抗原TACC1  癌、胃癌抗原GA55抗體

雌二,β-雌二SREBP-1(Sterol Regulatory Element Binding Protein-1)  固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1抗原TAAL6/Transmembrane 4 L6 family member 1  腫瘤相關(guān)抗原L6抗體

雌二,β-雌二（標(biāo)準(zhǔn)品）AKAP12A/SSeCKS peptide  絲氨酸抑制蛋白激酶C底物抗原TAAL6  腫瘤相關(guān)蛋白抗原L6抗體

苯甲酸雌二Fut4/CD15/SSEA-1(Stage-specific embryonic surface antigen 1)  階段特異性胚胎表面抗原-1抗原T7 tag  T7 tag標(biāo)簽抗體

苯甲酸雌二（標(biāo)準(zhǔn)品）SSTR1 (somatostatin receptor 1)  生長(zhǎng)抑素受體1(SSTR1)抗原T4/L-Thyroxine  甲狀腺素T4抗體

雌三SSTR2 (somatostatin receptor 2)  生長(zhǎng)抑素受體2抗原T4/L-Thyroxine  甲狀腺素T4抗體

雌三(標(biāo)準(zhǔn)品)SSTR3 peptide  生長(zhǎng)抑素受體3抗原T3  *狀腺素T3抗體
巴氏*線蟲PCR檢測(cè)試劑盒廠家人促甲狀腺素釋放激素(TRH)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃1KU

人促卵泡素(FSH)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：250毫克

人促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃500u

人促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：50毫克

人促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：20毫克

人促生長(zhǎng)激素釋放激素(GHRH)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃500u

人促睡眠肽(DSIP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：1000u

人促胃液素受體(GsaR)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃15KU
檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。