注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
Chondroitin sulfate硝酸鎂,六 AR，99%硫酸鎳，七 99.99% metals basis

Citric acid乙酸錳,四  AR,99.0%氨基磺酸鎳 CP

Cleroindicin B試劑汞 AR,99.999％ metals basis氨基磺酸鎳 電鍍級(jí)

Cleroindicin C CP,99.0%（）氨基磺酸鎳 99%,高純級(jí)

Cleroindicin D AR,98.5%（）氫氧化鎳 Ni 61%

Cleroindicin Eβ-巰基乙 AR,99.0%（）氟化鎳 AR

Cleroindicin F發(fā)煙硝酸 GR氟化鎳 CP

Coclauril焦銻酸 AR,99.0%氟化鎳 電鍍級(jí)

Conduritol A焦亞硫酸 AR，95.0%堿式碳酸鎳 AR

Cyclo(Ala-Phe)銻 AR,99.5%堿式碳酸鎳 CP

Cyclo(Ala-Tyr)銻 CP,99.0%堿式碳酸鎳 99.9% metals basis

Cyclo(Hpro-Leu)亞硫酸氫 AR溴化鎳 22.5%溶液

Cyclo(Ile-Ala)氧化亞錫 AR，99%氯化鎳,六 AR，98%

Cyclo(Ile-Leu)無(wú)亞* anhydrous,AR,98.0%氯化鎳,六 CP，97%

Cyclo(Ile-Val)硫酸亞錫 CP,97.0%氯化鎳,六 GR，98%

Cyclo(Leu-Ala)結(jié)晶四氯化錫 AR,99.0%  氯化鎳,六 ACS

4-(2-吡啶偶氮)間苯二酚(AR)p27 Kip1 Antibodyphospho-BACH1/BRIP1(Ser990)  磷酸化癌易感基因相互作用蛋白1抗體

4-(2-吡啶偶氮)間苯二酚(98%)GLI1 Antibodyphospho-BACE1(Ser498)  磷酸化β分泌酶抗體

氯化溶液(3.3mol/L(3.3N))CD28 (CD28.2) Mouse mAb (PerCP-Cy5.5® Conjugate)phospho-AXL (Tyr698+Tyr702+Tyr703)  磷酸化粘附相關(guān)激酶抗體

氯化溶液(3mol/L(3N))GFP AntibodyPhospho-Aurora B(Thr232)/Aurora C(Thr198)  磷酸化有絲分裂激酶B/C抗體

重鉻酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.998%)Calpain 1 Large Subunit (Mu-type) AntibodyPhospho-Aurora A(Thr288)  磷酸化有絲分裂激酶A抗體

重鉻酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.1mol/L)p57 Kip2 Antibodyphospho-ATXN1(Thr236)  磷酸化失調(diào)癥蛋白1抗體

重鉻酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(1/24mol/L(0.25N))p57 Kip2 Antibodyphospho-ATXN1(Ser775)  磷酸化失調(diào)癥蛋白1抗體

重鉻酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(1/60mol/L(0.1N))FastScan™ Total Smad2 ELISA Kitphospho-ATRIP (Ser68+Ser72)  系統(tǒng)性紅斑狼瘡先關(guān)蛋白TREX1抗體

硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.1000mol/L(0.1N))Phospho-p57 Kip2 (Thr310) AntibodyPhospho-ATRIP (Ser224)  系統(tǒng)性紅斑狼瘡先關(guān)蛋白TREX1抗體

硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(100g/L)EGR3 Antibodyphospho-ATR/ACTR(Ser428)  磷酸化ATR抗體
類(lèi)圓線蟲(chóng)通用PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格2,4-Difluorothiophel多肽試劑　1G

4-Fluorothiophel, ≥98.0 %多肽試劑　5G

3-Fluorothiophel,≥98.0 %多肽試劑　1G

2-Fluorothiophel,≥97.0 %多肽試劑　1G

2-Ami-4-chlorobenzenethiol,≥96.0 %多肽試劑　5G

4-Nitrothiophel, ≥90.0 %多肽試劑　5G

3-Methyl-1-butanethiol,≥97.0%多肽試劑　5G

2,3-Butanedithiol,≥98.0 %多肽試劑　1G

3-(Methylthio)-1-hexal,≥99.0 %多肽試劑　5G

Furfuryl mercaptan ,≥98.0 %多肽試劑　25G

Cyclohexanethiol,≥98%多肽試劑　25ML

1-Octadecanethiol, ≥97%多肽試劑　25G

4-Amithiophel ,≥96.0%多肽試劑　5G

3-Amithiophel ,≥97.0%多肽試劑　5G

2-Propene-1-thiol多肽試劑　25ML
檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。