注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
Magnesium gluconate叔丁氧羰基-D-天冬氨酸 4-芐酯 98%乙氧嘧磺隆 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99%

Copper gluconate叔丁氧羰?；鵇-天冬氨酸Β-環(huán)己酯 98%戊菊酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品，91%

Potassium gluconate三吡咯烷基溴化鏻六氟磷酸鹽 98%戊菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=3%，基體：石油

DHABoc-3-(2-吡啶基)-L-氨酸 98%戊菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=5%，基體：石油

Magnesium carbonate hydroxide叔丁氧羰基-L-谷氨酸 5-環(huán)己酯 98%惡唑酮菌 分析標(biāo)準(zhǔn)品，98.5%

D-PanthelBoc-O-芐基-D-蘇氨酸 98%氟蟲脲 分析標(biāo)準(zhǔn)品，98%

MaltitolCbz-L-蘇氨酸芐酯 98%氟磺胺草 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99.5%

Fructo-oligosaccharideO-苯基-N-叔丁基羰基-L-酪氨酸 98%氟酰胺 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99.5%

Isomalto-oligosaccharideN-叔丁氧羰基-L-天冬氨酸 4-叔丁酯二環(huán)己胺鹽  98%氟硅唑 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99.8%

SucraloseN-叔丁氧羰基-D-天冬氨酸 1-芐酯  BR銳勁特 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%(HPLC)

Ascorbyl palmitateS-乙酰胺基-N-叔丁氧羰基-L-半胱氨酸  96%丁苯威 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99%

xylo-oligosaccharidesN-叔丁氧羰基-S-[(乙酰氨基)甲基]-L-半胱氨酸 4-酯  98%仲丁威標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=2%

Galacto-OligosaccharidesBoc-S-芐基-L-半光氨酸  99% 仲丁威標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=6%

DulcitolN-叔丁氧羰基-S-(4-甲基)-L-半胱氨酸  96%精乙基噁唑禾草靈 分析標(biāo)準(zhǔn)品，97%

ErythritolBOC-S-(4-METHOXYBENZYL)-L-半胱氨酸  98% 甲標(biāo)準(zhǔn)溶液 100mg/L，溶劑：

L（-）FucoseN-Boc-N'-三苯甲基-L-谷氨酰胺;N-叔丁氧羰基-N'-三苯甲基-L-谷氨殺螟硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=3%，酮（）

苯(anhydrous,99.8%)TTK AntibodyMRG15  轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子MRG15抗體

苯(ACS,≥99.0%)TTK AntibodyMRF/C11orf9  髓鞘基因調(diào)控因子抗體

2,2′-雙溴雙苯(98.0%)Cleaved-PARP (Asp214) (E2T4K) Mouse mAbMre11/HNGS1  DNA損傷關(guān)鍵蛋白Mre11抗體

氯苯(無級(jí), 99.5%)CLK3 AntibodyMRCK alpha/CDC42BPA  CDC42結(jié)合蛋白激酶α抗體（MRCKα）

4-氟溴乙基苯(97%)DNMT3A (D2H4B) Rabbit mAbMRC2/CD280  巨噬細(xì)胞甘露糖受體2抗體

2-溴-6-氨基吡啶(98%)VRK3 AntibodyMRC1/CD206  巨噬細(xì)胞甘露糖受體抗體

3-氨基-2-氟吡啶(95%)eIF3J AntibodyMRC1/CD206  巨噬細(xì)胞甘露糖受體抗體

2-氯-3-氟吡啶(98%)Human CD40 Ligand (hCD40L)M-RAS/Mras  原癌基因M-ras抗體

2,2′-聯(lián)吡啶-3,3′-二(98%)Blk AntibodyMPZL2/EVA1  髓鞘蛋白P0樣蛋白2抗體

4'-(4-溴苯基)-2,2':6',2''-三聯(lián)吡啶(97.0 %)eIF6 AntibodyMPS1/TTK  單極紡錘體蛋白激酶1抗體
天花病毒PCR檢測(cè)試劑盒廠家人膽囊收縮素/縮膽囊素八肽(CCK-8)ELISA試劑盒英文名稱：Human cholecystokinin octapeptide，CCK-8 ELISA Kit進(jìn)口/原裝

人膽酸(CA)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Cholic acid，CA ELISA Kit*

人彈性蛋白(ELN)ELISA試劑盒英文名稱：Human Elastin,ELN ELISA Kit進(jìn)口/原裝

人彈性蛋白酶(Elastase)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Elastase ELISA Kit進(jìn)口/原裝

人蛋白C(Protein C)ELISA試劑盒英文名稱：Human Protein C ELISA Kit進(jìn)口/原裝

人蛋白S(Protein S)ELISA試劑盒英文名稱：Human Protein S ELISA Kit進(jìn)口/原裝小鼠雄烯二(ASD)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠雄激素(androgen)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7(Smad7)ELISA試劑盒      組裝/原裝         
檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。