?
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
9-氨基吖啶單鹽酸單水合物(>98%,BS)NRMT (D9D6P) Rabbit mAb4,4'-(六氟異)二酞酸酐

9-咔唑(>95%,BR)Lamin B1 (D9V6H) Rabbit mAb葡萄糖酸亞鐵鹽

?；?/font>(>99%,BR)EXPAND1/MUM1 (D1Z6Y) Rabbit mAb-酚

溴化酰膽(>98%,BR)Ubiquityl-PCNA (Lys164) (D5C7P) Rabbit mAb2,二-5-基嘧啶

酮肟(>98%,BR)BRD4 (E2A7X) Rabbit mAb2-羥基-6-甲酸

化酰膽(>98%,BR)Phospho-4E-BP1 (Ser65) (D9G1Q) Rabbit mAb-嗎啉基-1,2,5-噻二唑

酸性藍(lán)29(>50%，Ind Grade)Securin (D2B6O) Rabbit mAb2-溴-硝基-1-(三氟甲氧基)

酸性藍(lán)40(>50%,BS)Phospho-Lamin A/C (Ser22) (D2B2E) XP® Rabbit mAb甲滅酸（甲芬那酸）

酸性品紅6B(>50%,BS)Phospho-Lamin A/C (Ser22) (D2B2E) XP® Rabbit mAb4,6-二氨基-2-甲基巰基嘧啶

吖啶鹽酸鹽(>98%，BS)DNMT3L (E1Y7Q) Rabbit mAb (Mouse Specific)-2-吡啶羧酸甲酯

1-金剛烷甲酸(>99%,BR)HYOU1 Antibody1-辛基-2,二甲基咪唑鹽

B1(>98%,BR)Lmx1B (D1E2) Rabbit mAb2-[2-(甲氧基)]酚

B2(>98%,BR)CHD1L (E1I8C) Rabbit mAb亞甲基環(huán)丁

G1(>98%,BR)Phospho-Akt1 (Ser129) (D4P7F) Rabbit mAb噁唑羧酸酯

G2(>98%,BR)Phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) (D13A11) XP® Rabbit mAb  (Alexa Fluor® 555 Conjuga)4,4'-二氨基二-2,2'-二磺酸

茜素黃R鈉鹽XPF (D3G8C) Rabbit mAb基-甲酸甲酯

D-阿洛糖(>98%,BR)Sec31A (D1G7I) Rabbit mAb2-羥基-5--三氟甲基吡啶

α-葡萄糖縮(>98%,BR)Atg13 (E1Y9V) Rabbit mAb對二甲氨基甲酸異戊酯

骨成型蛋白15(BMP-15/GDF-9B)ELISA試劑盒GLI1  下游轉(zhuǎn)錄因子Gli1蛋白100 ul

骨保護(hù)素(OPG)ELISA試劑盒GLP-1 (7-36)  胰高血糖素樣肽-1100 ul

谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶pi基因(GSTpi)ELISA試劑盒GLP-1  胰高血糖素樣肽-1100 ul

谷胱甘肽還原酶(GR)ELISA試劑盒GLP-1/KG-31  GLP-1100 ul

谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)ELISA試劑盒GLP-1R  胰高血糖素樣肽-1受體100 ul

谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶TT(GSTπ)ELISA試劑盒GLP-2  胰高血糖素樣肽-2100 ul

谷胱甘肽(GSH)ELISA試劑盒GLP-2  胰高血糖素樣肽-2100 ul

谷氨酰轉(zhuǎn)移酶6(IgM)ELISA試劑盒GLUT1  葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白120 ul

谷氨酰轉(zhuǎn)移酶2(IgG)ELISA試劑盒GLUT2  葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2100 ul
偏肺病毒PCR檢測試劑盒價(jià)格雙特異性磷酸酶22抗體Sulfaguanidine中文名：磺胺脒別名：分子式：C7H10N4O2S

脫氧核糖核酸酶γ抗體Gatifloxacin Mesylate中文名：甲磺酸加替沙星別名：分子式：C20H26FN3O7S

DNA斷裂因子抗體（蛋白酶激活脫氧核糖核酸酶）Flumequine sodium中文名：氟甲喹鈉別名：分子式：C14H11FNNaO3

死亡相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子1抗體Bromhexine hydrochloride中文名：鹽酸溴己新別名：分子式：C14H21Br2ClN2

脫氧核糖核酸酶1抗體Sarafloxacin hydrochloride中文名：鹽酸沙拉沙星別名：分子式：C20H18ClF2N3O3