產(chǎn)品名稱：血管內(nèi)皮細胞；ECV304
英文簡稱：ECV304細胞

貨號：LZ-X968583
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁生長

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細胞計數(shù)板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
   5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
     如果有細菌或真菌污染，會嚴(yán)重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測，這樣通?？梢杂行p少假陽性的壞死細胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2--5-硝吡啶蛹蟲草（北冬蟲夏草，北蟲草）注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

2--5-硝吡啶亞褐鈸孔菌拉丁屬名: Fusarium tricinctum

3-(三氟)苯三線鐮孢拉丁屬名: Aspergillus amsodami

3-(三氟)苯阿姆斯特丹曲霉拉丁屬名: RP4

3-(三氟)苯RP4質(zhì)粒拉丁屬名: Cladosporium tenuissimum

3-三氟細枝孢拉丁屬名: Xanthomonas maltophilia

3-三氟嗜麥芽黃單胞菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

3-三氟樟疫霉注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

1,7-二溴庚烷簡青霉拉丁屬名: Enterobacter sp.

1,8-二溴辛烷Enterobacter sp.拉丁屬名: Lactobacillus  rhamnosus

1,8-二溴辛烷鼠李糖乳桿菌拉丁屬名: Bacillus stratosphericus

1,8-二溴辛烷平流層芽孢桿菌拉丁屬名: Aspergillus flavus

1,9-二溴壬烷拉丁屬名: Lactobacillus  plantarum subsp. plantarum

1,9-二溴壬烷植物乳桿菌植物亞種拉丁屬名: Ustilago maydis

4-三氟苯玉米黑粉菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

4-三氟苯香菇注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用
ECV304細胞豚鼠脂蛋白a(LP-a)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒3-氧代環(huán)丁氨叔丁酯魯氏接合酵母拉丁屬名: Mrakia frigida

豚鼠單氧化酶(MAO)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒4-三氟異酯冷溫木拉克酵母拉丁屬名: Bacillus subtilis

豚鼠唾液結(jié)合免疫球蛋白樣凝集素12(SIGLEC12)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒4-三氟異酯枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus  cereus

豚鼠骨骼肌慢肌肌鈣蛋白I(TNNI1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒4-三氟異酯蠟狀芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus  thuringiensis

豚鼠大腦糖原磷化酶(PYGB)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒化銠蘇云金芽孢桿菌拉丁屬名: Colletotrichum dematium (Persoon :Fries) Grove

豚鼠胃泌素34(GT-34)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 化銠束狀盤孢*拉丁屬名: Cyathus pallidus

豚鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 三(2,2,6,6-四-3,5-庚二)釹(III)白被黑蛋巢拉丁屬名: Pleurotus cystidiosus  Miller

豚鼠間隙連接蛋白31(CX31)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 三(2,2,6,6-四-3,5-庚二)釹(III)擬囊體側(cè)耳、(鮑魚菇)拉丁屬名: Fusarium oxysporum

豚鼠轉(zhuǎn)錄激活因子-2(ATF-2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 9,9-雙(4-氨苯)芴辣椒枯萎注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

豚鼠肌生成素(MYOG)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Pancuronium dibromide紅大耳拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae

豚鼠肝臟膠原凝集素1(CLL1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 2,4-二氟苯釀酒酵母拉丁屬名: Ruinenia rubra

豚鼠質(zhì)金屬蛋白酶8(MMP-8)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒2,4-二氟苯紅色瑞恩氏酵母拉丁屬名: gallinarum

豚鼠G蛋白偶聯(lián)受體家族C5組成員(GPRC5A)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒十二烷三苯溴化膦雞傷寒沙門氏菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

豚鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 十二烷三苯溴化膦秦氏蜜環(huán)菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

豚鼠皮膚反應(yīng)因子/炎性因子(SRF/IF)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Plerixafor 8HCl (AP92100 8HCl)丁香假單胞桿菌番茄致病變種*拉丁屬名: Penicillium rubidurum

豚鼠E選擇素(SELE)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 順,順-1,5-環(huán)辛二烯, 99%, 50-200ppm Irganox 1076穩(wěn)定劑紅硬囊果青霉拉丁屬名: Bacillus subtilis