產(chǎn)品屬性：

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標準規(guī)格酶標儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

標本要求：

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時；更長時間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復(fù)凍融。

2.  標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標準 管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復(fù)作對倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實驗前準備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（2）血漿：

應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（3）尿液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

（4）細胞培養(yǎng)上清：

檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。

（5）培養(yǎng)細胞

檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（6）組織標本

切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

水通道蛋白1(AQP-1)試劑盒宋果靈3-嗎啉-2-羥磺 99%對叔丁芐硫 97%

水通道蛋白1(AQP-1)試劑盒多根3-嗎啉-2-羥磺鈉 99%4'-叔丁-4-丁酰苯 98%

水通道蛋白0(AQP-0)試劑盒苯酰次化硝四氮唑藍 98%L-酪氨乙酯鹽鹽 98%

水通道蛋白0(AQP-0)試劑盒查斯曼寧化硝四氮唑藍 分子生物學(xué)級乙酰苯 AR,99.0%

類風(fēng)濕因子(RF)試劑盒麗江茚三，水合 AR,95.0%5-芐硫四氮唑 98.5%

類風(fēng)濕因子(RF)試劑盒去茚三，水合 ACS reagent, ≥98.0% (UV)L-上腺素 98%（劇品）

抗鏈球菌溶血素O/抗O(ASO)試劑盒脫氧5-硝 98%稱量紙 190mm*250mm，500張/包

抗鏈球菌溶血素O/抗O(ASO)試劑盒乙酰4-氟-7-硝-2,1,3-苯并氧雜惡二唑 99%檸檬三酯 98%

上腺皮質(zhì)抗體(ACA)試劑盒冉4-硝-7-哌苯并氧雜惡二唑 98%2-氨-4，6-二嘧啶 98%

上腺皮質(zhì)抗體(ACA)試劑盒12-表-歐4-肼-7-硝-2,1,3-苯并氧雜惡二唑 98%2-氨-4，6-二嘧啶 98%

上腺皮質(zhì)抗體(ACA)試劑盒甘露三糖1,4-哌二乙磺 99%4,6-二-2-巰嘧啶 98%

上腺皮質(zhì)抗體(ACA)試劑盒哌-N,N-雙(2-羥烷磺) 99%4,6-二嘧啶 98%

抗小球底膜抗體(GBM)試劑盒隱色孔雀石綠苯磺酰氟 ≥98.5% (GC)N,N′-二苯-N,N′-(3-)-1,1′-聯(lián)苯-4,4′-二（TPD）

抗小球底膜抗體(GBM)試劑盒N-荷葉對二苯二聚體 99%浴銅靈  98%

β2微球蛋白(BMG/β2-MG)試劑盒去氫荷葉對磷二鈉 98%2-溴芴 97%

β2微球蛋白(BMG/β2-MG)試劑盒多巴鹽鹽5’-磷吡哆,一水 98%浴銅靈 purified by sublimation, 99.99% trace metals basis
PIBF孕激素誘導(dǎo)阻斷因子ELISA試劑盒熒光染料Hoechst33342 能少許進入正常細胞膜，使其染上低藍色，而凋亡細胞的膜通透性增強，因此進入凋亡細胞中的Hoechst33342 比正常細胞的多，熒光強度要比正常細胞中要高，此外，凋亡細胞的染色體DNA 的結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變從而使該染料能更有效地與DNA 結(jié)合，并且凋亡細胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到損傷不能有效地將Hoechst33342 排出到細胞外使之在細胞內(nèi)積累增加等都使凋亡細胞的藍色熒光增強。而PI 染料是不能進入細胞膜完整的正常細胞和凋亡細胞中，即活細胞對PI 染料拒染，而壞死細胞由于膜完整性在早期即已破損，可被PI 染料染色。

用Hoechst33342 結(jié)合PI 染料對凋亡細胞進行雙染色，就可在流式細胞儀上將正常細胞、凋亡細胞和壞死細胞區(qū)別開來。在雙變量流式細胞儀的散點圖上，這三群細胞表現(xiàn)分別為：正常細胞為低藍色/低紅色（Hoechst33342+/PI+），凋亡細胞為高藍色/低紅色（Hoechst33342++/PI+），壞死細胞為低藍色/高紅色（Hoechst33342+/PI++）

儲存：2-8℃，避光，有效期一年。

操作步驟：

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。