產(chǎn)品屬性：

需要而未提供的試劑和器材：

1. 產(chǎn)品僅用于科研標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

2. 高速離心機(jī)

3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測(cè)樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6. 蒸餾水，容量瓶等。

標(biāo)本要求：

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

備試劑與收集血樣：

1.  收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)， 2-8 ℃ 保存48 小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反復(fù)凍融。

2.  標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管，管加標(biāo)本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋，從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對(duì)照。

3.  10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測(cè)程序：

1.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：

ELISA進(jìn)口試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

（1）血清

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（2）血漿：

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（3）尿液：

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：

檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。

（5）培養(yǎng)細(xì)胞

檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

（6）組織標(biāo)本

切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

Phospho-ATP1A1 (Ser16)    磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體

Acetyl CoA Carboxylase    乙酰羧化酶抗體

Phospho-Acetyl Coenzyme A carboxylase alpha (Ser78)    磷酸化乙酰羧化酶抗體

Phospho-Ack1 (Tyr859 + 860)    磷酸化Ack1抗體

phospho-AMPK alpha-1(Ser485+Ser491)    磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體

phospho-AMPK beta 1 (Ser108)    磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體

phospho-ALK (Tyr1604)    磷酸化間變型淋巴瘤激酶抗體

phospho-ATM(Ser1981)    磷酸化毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗體

phospho-ATP citrate lyase (Ser455)    磷酸化三磷酸腺檸檬酸裂解酶抗體

phospho-ATR (Ser428)    磷酸化ATR抗體

AMN1    細(xì)胞核重定位及紡錘體檢查點(diǎn)蛋白AMN1抗體

ALG11    天連接糖基化11抗體

ASF1A    細(xì)胞衰老相關(guān)蛋白ASF1A抗體

AGPHD1    氨基糖苷類磷酸結(jié)構(gòu)域蛋白抗體

ASGPR1    唾液酸糖蛋白受體1抗體

ARSF    芳香基硫酸酯酶F抗體    NE-B重酒石酸ISA試劑盒    NE-B ELISA Kit    48T/96T

TAF腫瘤血管生長(zhǎng)因子ELISA試劑盒    TAF ELISA Kit    48T/96T

TAA腫瘤相關(guān)抗原ELISA試劑盒    TAA ELISA Kit    48T/96T

TSTA腫瘤特異性移植抗原ELISA試劑盒    TSTA ELISA Kit    48T/96T

TSGF腫瘤特異性生長(zhǎng)因子ELISA試劑盒    TSGF ELISA Kit    48T/96T

TSA腫瘤特異性抗原ELISA試劑盒    TSA ELISA Kit    48T/96T

TGSF腫瘤特異生長(zhǎng)因子/腫瘤相關(guān)因子ELISA試劑盒    TGSF ELISA Kit    48T/96T

TNFAIP6腫瘤壞死因子誘導(dǎo)基因6蛋白ELISA試劑盒    TNFAIP6 ELISA Kit    48T/96T

TWEAK腫瘤壞死因子相關(guān)弱凋亡誘導(dǎo)因子ELISA試劑盒    TWEAK ELISA Kit    48T/96T

TRANCE腫瘤壞死因子相關(guān)激活誘導(dǎo)因子ELISA試劑盒    TRANCE ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R3腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體受體3ELISA試劑盒    TRAIL-R3 ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R2/DR5腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體受體2ELISA試劑盒    TRAIL-R2 ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R4腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4ELISA試劑盒    TRAIL-R4 ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R3腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3ELISA試劑盒    TRAIL-R3 ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R1腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體1ELISA試劑盒    TRAIL-R1 ELISA Kit    48T/96T

TRAF6腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6ELISA試劑盒    TRAF6 ELISA kit    48T/96T

TRAF1腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子1ELISA試劑盒    TRAF1 ELISA kit    48T/96T

TNFRSF18腫瘤壞死因子受體超家族成員18ELISA試劑盒    TNFRSF18 ELISA KIT    48T/96T

TNFsR-Ⅱ腫瘤壞死因子可溶性受體ⅡELISA試劑盒    TNFsR-Ⅱ ELISA Kit     48T/96T

TNFsR-Ⅰ腫瘤壞死因子可溶性受體ⅠELISA試劑盒    TNFsR-ⅠELISA Kit     48T/96T

TL1A/TNFSF15腫瘤壞死因子超家族15ELISA試劑盒    TL1A/TNFSF15 ELISA Kit    48T/96T

TBA總膽汁酸ELISA試劑盒腫瘤壞死因子γELISA試劑盒    TNFγ ELISA Kit    48T/96T

TNFβ腫瘤壞死因子βELISA試劑盒    TNFβ ELISA Kit    48T/96T

TACE腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)化酶ELISA試劑盒    TACE ELISA Kit    48T/96T

操作步驟：

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。